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          斑貼試驗的規范步驟技巧學習一下

          日期:2023-03-28瀏覽:149次

            斑貼試驗是一種常用的實驗方法,主要用于鑒定細菌的血清學分類和鑒別。在斑貼試驗中,通過將一種特定的血清涂在細菌表面上,觀察細菌與血清反應的情況,來推測細菌的種類和特性。本文將詳細介紹其步驟。
           
            一、實驗器材
           
            首先需要準備的是實驗器材。主要有以下幾種:
           
            1.試管:用于懸浮細菌。
           
            2.離心管:用于進行離心。
           
            3.離心機:用于離心。
           
            4.滴定針:用于取樣。
           
            5.試驗板:用于固定細菌。
           
            6.無毒性普魯士藍鹽酸鹽:用于檢測斑點。
           
            7.脫氧膽酸:可使細菌細胞壁破裂,釋放抗原。
           
            8.磷緩沖液:用于稀釋抗原和血清。
           
            9.乳化器:用于使血清與抗原混合。
           
            10.洗滌緩沖液:用于清洗試驗板。
           
            11.組織塊刀:用于切取細菌。
           
            二、實驗步驟
           
            1.準備工作
           
            a.準備細菌液:用熒光顯微鏡檢測活菌及其腫脹度,將細菌懸浮在磷緩沖液中,搖勻后離心,取上清液。
           
            b.制備抗原液:將細菌取上清液和脫氧膽酸混合,振蕩。
           
            c.制備血清液:從鑒定正常動物、正常人或鑒定過該種病菌的患者的全血中,經離心制成的腫脹度合適的血清。
           
            注:處理時注意消毒,防止污染。
           
            2.制備孔板
           
            取一張孔板,加入一個滴定單位(約30微升)的抗原液到每個孔中,等孔板干燥好。
           
            3.孔板實驗
           
            a.采用或制備的抗血清,加入各個孔中,干燥后在37℃溫箱中孵育。
           
            b.在隔夜培養的試驗菌中,PDA或NA培養基上切取一枚直徑約2毫米細菌菌落,用滴定針在孔中放入一滴解膠體滴定溶液,壓在菌落上壓一下。
           
            c.將孔板保持在水平面上,用細胞培養箱中備好的恒溫環境下,孵育24小時。
           
            d.將孔板用無毒性普魯士藍鹽酸鹽染色,觀察每個孔的反應情況。
           
            4.結果判定
           
            反應陰性的孔,一個小的斑貼點也沒有,可認定此菌株不與該抗血清反應。
           
            反應陽性的孔,有一個小的斑貼點出現,應當作為深入研究的對象。
           
            總之,斑貼試驗是一種非常重要的實驗方法,可用于確定細菌種類和特性,從而指導臨床治療和疾病控制。實驗步驟簡單,但是需要注意消毒衛生和實驗器材的準備工作,以獲得準確、可靠的實驗結果。

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